近期有客户向我们咨询胎牛血清细胞培养中黑点如何防止生成?对此我司技术专员给出了详细了解释,为防止客户由于操作方面而使黑点生成的办法。因此定要做好以下几点。方可使细胞培养顺利。
1.尽可能地减少血清冻融次数。
2.培养基无需37℃水浴。
3.培养基保持zuiPH 值7.0-7.2。
4.严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
5.掌握细胞传代的zui时机,细胞切勿生长过老。
一、化冻
将血清从-20 度冰箱中取出,室温(或浸于自来水中)化冻(约需要30分钟至2小时,也可放于4度冰箱化冻过夜;化冻后若不马上灭活,可以放入4度冰箱中暂时保存)
二、灭活
1.放入室温的水浴锅内开始加热(同时放入一个空的血清瓶,内装100ml自来水,插入一根温度计,温度监控以此为准)
2.当温度计显示56度时,停止加热,改为间断加热,维持56度(±0.5度)30分钟(±3分钟;若不小心使温度上升超过56度,则:若仍未超过60度,且时间很短,比如不超过5分钟,则仍可使用;若超过60度,或者时间较长,则弃去不用,或者尝试用于一些普通细胞的培养)
3.取出,自然冷却至室温(约需1-3小时),可分装或-20度继续冻存。
三、分装
1.转入无菌间,在超净台内将血清分装入10ml离心管中(注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀;用吸液管或吹大管吹出血清时要注意:不要吹出气泡(血清很粘稠,很容易产生气泡;如果产生气泡, 则在酒精灯火焰上过一下)。
2.放入-20 度冰箱冻存。
3.全部操作约需要4-6小时。
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