人白介素-18结合蛋白(IL-18BP)ELISA试剂盒原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 IL-18BP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 IL-18BP与单抗结合，加入生物素化的抗人IL-18BP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，zui后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，IL-18BP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IL-18BP浓度。

试剂盒组成（2-8℃保存）

人白介素-18结合蛋白(IL-18BP)ELISA试剂盒准备试剂与收集血样

1.          收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。血清、血浆、细胞培养上清至少作1：5稀释（取50ul，加标本稀释液200ul,稀释5倍）。

2.          标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成4000pg/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在*管中加入4000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。

3.          10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。

4.         洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

人白介素-18结合蛋白(IL-18BP)ELISA试剂盒检测程序

1.          加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

2.          洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

3.          每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。

4.          洗板：同前。

5.          每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。

6.          洗板：同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。

8.          每孔加入100ul终止液混匀。

9.          30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1.          所有OD值都应减除空白值后再行计算。

2.          以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

3.          根据样品OD值在该曲线图上查出相应IL-18BP含量，再乘上稀释倍数即可。

人白介素-18结合蛋白(IL-18BP)ELISA试剂盒性能

             1.   灵敏度：zui小的IL-18BP 检测浓度小于15pg/ml。

2.        特异性：可同时检测重组或天然的人IL-18BP。不与人其它细胞因子有交叉反应。

3.        重复性：板内、板见变异系数均小于10.2％。

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