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胰蛋白酶试剂盒操作原理
更新时间:2012-12-03      阅读:1456

                                     胰蛋白酶试剂盒操作原理

 试剂盒性能:

  1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

  2.批内与批见应分别小于9%和11%

  检测范围:

  0.2IU/L - 6IU/L
使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中膜蛋白含量。

胰蛋白酶试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胰蛋白酶(trypsin)水平。用纯化的人胰蛋白酶(trypsin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰蛋白酶(trypsin),再与HRP标记的胰蛋白酶(trypsin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰蛋白酶(trypsin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人胰蛋白酶(trypsin)浓度。
标本的采集及保存
  1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
胰蛋白酶试剂盒注意事项

 1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6. 底物请避光保存。

  7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

  9. 本试剂不同批号组分不得混用。

  10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

胰蛋白酶试剂盒操作步骤:
       实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
    1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
   2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
  3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
  4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
  5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
  6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔显色不明显,即可终止)。
  7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
  8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

有效期:6个月
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