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酶联免疫吸附法中有技术问答精辟解析
更新时间:2014-11-24      阅读:863

上海恒远生物公司所采用的酶免疫测定(enzyme immunoassay, EIA)或免疫酶技术(immunoenzymatic technique)是指用酶标记抗体或酶标记抗体进行的抗原抗体反应。它采用抗原与抗体的特异反应与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。目前常用的方法称为酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),其方法简单,方便讯速,特异性强。ELISA是由抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。那么酶联免疫吸附法中有哪些技术问答,请点击恒远查询相关解析:(以下是根据客户问题整理精品解答)

问:人的Quantikine ELISA试剂盒是否有相关的对照?

答:上海恒远R&D 为人的Quantikine ELISA试剂盒提供三重对照组。请同我们以便确定产品的目录号。

问:我想使用你们目录中的重组蛋白作为我的ELISA的对照,但我发现质量上有差异。这是为什么?

答:首先要考虑的是重组蛋白的质量会高出试剂盒的可测试范围数倍,必须将重组蛋白稀释多次才能得到试剂盒的测试范围。一般来说是从mg/毫升稀释到pg/毫升,在这中间光是移液管的误差就达到了可测量的水平。

其次要考虑的是R&D Elisa试剂盒的免疫测试方法测量的蛋白水平是用一种抗体捕获的、用第二种抗体测定的,这种测定是在试剂盒研发时与标准蛋白校正过的。这些经过测定的早期标准蛋白成为基本校正物,后来的标准都同它校正。这样不同生产批号的免疫测定试剂盒将是一致的。这些基本校正物蛋白质量的测量方法也许与你的试剂管中蛋白质量的测定方法有所不同。

问:什么是竞争性ELISA?

答:竞争ELISA基于竞争结合技术,即样本中的待测分子与固定量的标记的同样分子(我们一般用碱性磷酸酶作为标记)同时与固定在孔板上的抗体的同一结合位点进行竞争,参照标准曲线,试验数据值是定量的。

问:什么是夹心ELISA?

答:夹层ELISA采用对样本中分析物的特异的抗体作为固定化的捕获抗体,然后用第二个带标记的抗体作检测,检测抗体对分析物也是专一的。当参照标准曲线时,试验数据值是定量的。

问:什么是直接ELISA?

答:直接ELISA是将被测的分析物直接包膜在微孔板表面,然后用测试抗体来证实被测分析物的存在。当与重组蛋白(标准曲线)进行参照时,试验数据值是半定量的。

问:恒远R&D 品牌的ELISA试剂盒可以做多少个样本?

答:R&D品牌的ELISA试剂盒为48T,96T的规格,分别48T可做6个标准曲线及42个样本,96T可做12个标准曲线及84个样本。

问:Quantikine ELISA试剂盒里都包括什么?

答:R&D Systems的Quantikine ELISA试剂盒是一个完整的试剂盒。它包含了一个已包板的微孔板、酶标抗体、标准蛋白、稀释剂、底物、终止剂、洗液和微孔板密封膜。所有试剂盒对实验说明书中所列样本都经充分验证,确保高质量。

问:什么是DuoSet?

答:DuoSet ELISA开发系统提供了足够的捕获抗体、测试抗体、标准蛋白和Streptavidin-HRP,可以做大约十五个96孔微孔板的实验。我们还提供了样本试验流程和与这一系统配套的试剂。DuoSet ELISA开发系统主要是为高通量筛选细胞培养的上清液所设计,但熟悉ELISA研发的实验人员已成功将其推广到血清和血浆样本的使用。

问:我是否可将标准曲线的两端延伸?

答:在任何情况下,我们都不支持超出确定范围的实验结果。在我们确定的测试范围,我们保证实验结果的可重复性。

问:为什么不将测试范围延伸到所述的灵敏度?

答:灵敏度是统计中大于零的可测到的zui低值。它是通过本底信号和试验的可变性计算出来的。灵敏度是将20个零复制物的中值加两个标准差从标准曲线换算成分析物的浓度。而zui低标准是我们可以放心的、仍可与标准曲线成直线相关的zui低点,因而是可定量的。

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