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详情介绍
ELISA试剂盒 ELISA检测试剂盒 ELISA KIT
产品名称:大鼠白三烯E4
英文名称:Rat leukotriene E4,LT-E4 ELISA KIT
使用范围:科研
产品规格:96人份/48人份
各种种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛、羊…
标本齐全:血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液、关节液、胸腔溢液等…
经营品牌:美国RD RB IBL
保存条件:2-8℃
有效期:6个月
运输条件:低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。
大鼠白三烯E4 ELISA技术操作要点,抗原和抗体
在ELISA实施过程中,抗原和抗体的质量是实验是否成功的关键因素。本法要求所用抗原纯度高,抗体效价高、亲和力强。
ELISA所用抗原有三个来源:天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于动物组织或体液、微生物培养物等,一般含有多种抗原成分,需经纯化,提取出特定的抗原成分后才可应用,因此也称提纯抗原(purifiedantigen)。重组抗原(recombinantantigen)和多肽抗原(peptideantigen)均为人工合成品,使用安全,而且纯度高,干扰物质少。因此虽然制备合成抗原有较高的技术难度且要求较为昂贵的仪器设备和试剂,其应用仍十分普遍,特别是对那些天然抗原不易得到的试验,更显出其独到之处。
用于ELISA的抗体有多克隆的和单克隆的。抗血清成分复杂,应从中提取IgG才可用于包被固相或酶标记。含单克隆抗体的小鼠腹水中的特异性抗体含量较高,有时可适当稀释后直接进行包被。制备酶结合物用的抗体的质量往往要求有较高的纯度。经硫酸铵盐析纯化的IgG可进一步用各种分子筛层析提纯。也可用亲和层析法提纯特异性IgG,如用酶消化IgG后提取的Fab片段,则效果更好。
ELISA技术操作要点,酶和底物
ELISA中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定,继续保留着它的活性部分和催化能力。在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。另外它的相应底物应易于制备和保存,价格低廉,有色产物易于测定,光吸收高。ELISA中zui常用的酶为辣根过氧化酶(HRP)和从牛肠粘膜或大肠杆菌提取的碱性磷酸酶(AP)。
HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,纯化方法也不复杂。它是一种糖蛋白,含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白,在275nm波长处有zui高吸收峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环,在403nm波长处有zui高吸收峰。